Схемы и таблицы для интерпретации результатов анализов на определение резус-фактора и пола плода по крови матери наборами «Тест-RHD плюс» и «Тест-SRY плюс»
Демонстрация программирования и запуска амплификации для определения резус-фактора и пола плода по крови матери на приборе ДТ Прайм производства «ДНК-технология», Россия
Демонстрация программирования и запуска амплификации для определения резус-фактора и пола плода по крови матери на приборе CFX96 производства «Bio-Rad», USA
Демонстрация программирования и запуска амплификации для определения резус-фактора и пола плода по крови матери на приборе Rotor-Gene 6000 производства «QIAGEN», Germany
Видеоинструкция по работе с наборами «Тест-RHD плюс» и «Тест-SRY плюс»
Список оборудования и расходных материалов для работы с тест-системами «Тест-RHD плюс» и «Тест-SRY плюс»
Каковы условия хранения наборов, которые используются для неинвазивных пренатальных
исследований?
Наборы «Тест-RHD плюс» и «Тест-SRY плюс» хранятся и транспортируются при температуре от минус
18 до минус 25°С. Допускается не более 50 циклов заморозки-разморозки. Срок годности 12
месяцев. Допускается транспортировка при температуре от 2 до 8°С не более трех суток.
Набор «Тест-RHD multi» хранится и транспортируется при температуре от 2°С до 8°С. Срок
годности 12 месяцев. Допускается транспортировка при комнатной температуре (15-25°C) не
более пяти суток.
Какие пробирки для забора крови необходимо использовать для определения резус-фактора и пола
плода?
Пробирки с ЕDTA (этилендиаминтетраацетат), сиреневая крышка: плазму нужно отделять в
течение 2 часов после забора крови.
Пробирки с CPDA (лимонная кислота, фосфат натрия, декстроза, аденин), желтая крышка:
допускается транспортировка цельной крови в лабораторию в течение 2 суток при
температуре 2-8°С.
Какие амплификаторы подходят для работы с тест-системами производства «ТестГен»?
QuantStudio 5, StepOnePlus («Applied Biosystems»/«ThermoFisher Scientific», USA)
LineGene 9600 Plus («Bioer», China).
С какой недели беременности можно брать кровь у беременных женщин для определения резус-фактора и пола плода?
С 10-й «эмбриологической» (12-й «акушерской») недели гестации. «Эмбриологические» недели считается со дня зачатия, «акушерские» - с первого дня последней менструации.
Всегда ли мы можем определить статус гена RHD у плода?
Набор реагентов "Тест-RHD плюс" выявляет фактическое наличие трёх экзонов гена резус-фактора RHD в образце ДНК. Наличие контроля выделения тотальной ДНК позволяет сделать дополнительный вывод о принадлежности гена резус-фактора при анализе плазмы крови беременной женщины. Если кривые экзонов резус-фактора начинают подниматься на тех же циклах, что и ген GAPDH, это говорит о том, что беременная женщина сама является резус-положительной. В этом случае определить резус-фактор плода данным набором не представляется возможным. То есть тест имеет указанную достоверность при условии резус-отрицательного статуса матери.
Что означает фраза «Выявлен ген резус-фактора у женщины»?
Такое возможно у резус-положительных беременных женщин или у фенотипически резус-отрицательных беременных, имеющих функционально неактивный ген (например, варианты мутаций Dweak, Dpartial, псевдоген RHD). Лица с этими редкими вариантами гена RHD в этом случае серологически будут резус-отрицательными. В таком случае определить резус-фактор плода методом ПЦР не представляется возможным.
Где найти дополнительную информацию о вариантах гаплотипов генов RhD и RhCE?
Особенности получения плазмы для проведения анализа на резус-фактор и пол плода.
Пробирку, в которую была взята кровь, нужно центрифугировать 10-15 мин при 2000-3000g, после чего аккуратно отобрать плазму и перенести её в отдельную одноразовую пробирку на 2 мл, избегая попадания в отбираемый материал сгустков лейкоцитов и слоя с эритроцитами. Пробирки с плазмой далее центрифугировать 15 минут при 13000g или 10 минут при 16000g, вновь отобрать надосадочную жидкость в отдельную пробирку, не затрагивая осадка на дне пробирки. Полученную плазму можно использовать далее для выделения ДНК.
Всегда ли отрицательный резус действительно отрицательный?
Сложная система генов группы крови Rh имеет многочисленные варианты. Существуют различные гаплотипы, в которых ген RHD представлен полностью или частично. Лица с редким вариантом гена RHD в этом случае серологически будут резус-отрицательными, но при постановке методом ПЦР можно выявить наличие гена RHD. Может быть ситуация, когда генетически резус-фактор пациентки положительный, но каким-то образом функция гена подавлена или ограничена (например, варианты мутаций Dweak или Dpartial), и серологически белок резус не определяется на поверхности эритроцитов. Также возможен вариант так называемого псевдогена RHD, при котором ген неактивен из-за инактивирующих мутаций.
Видеоинструкция по работе с набором «ДНК-Плазма-М»
Видеоинструкция по работе с набором «ДНК-Плазма-М-RT»
Видеоинструкция по работе с набором «ДНК-Ткань-Ф»
Методические рекомендации по подготовке клинического материала для проведения молекулярно-генетических исследований с целью выявления мутаций в генах KRAS, NRAS, BRAF методом ПЦР.
Каковы условия хранения наборов для экстракции ДНК?
Наборы реагентов «ДНК-Плазма-М», «ДНК-Плазма-М-RT», «ДНК-Ткань-Ф» должны храниться и
транспортироваться при температуре не выше +30°С. Срок годности 12 месяцев.
После вскрытия флаконов и добавления этилового спирта (95%) к растворам для промывки №1 и №2 срок годности составляет 6 месяцев. После разведения раствор протеиназы К следует хранить не более 6 месяцев при температуре ниже минус 18°С.
Как выделить ДНК из 2 мл плазмы и более?
Используйте набор «ДНК-Плазма-М-RT» для экстрации ДНК из 2-5 мл плазмы
Что делать при выпадении в осадок или расслоении компонентов наборов «ДНК-Плазма-М»,
«ДНК-Плазма-М-RT» и «ДНК-Ткань-Ф»?
Расслоение или выпадение осадка не влияет на качество приготовленных растворов. Если образовался
кристаллический осадок в одном или нескольких флаконах, необходимо прогреть их при 50°C до
полного растворения осадка и гомогенизации растворов. Все реагенты набора перед началом работы
необходимо тщательно перемешать.
Как повысить выход ДНК при экстракции из ткани набором «ДНК-Ткань-Ф»?
Увеличьте время лизиса, чтобы полностью лизировать образец. Если после 3 часов инкубации видны
нелизированные частицы ткани, добавьте еще 10 мкл раствора протеиназы K и продолжите инкубацию
еще 3 часа или оставьте на ночь.
Список оборудования и расходных материалов для работы с наборами реагентов для генотипирования полиморфных маркеров
Демонстрация программирования и запуска амплификации для генотипирования полиморфных маркеров методом анализа кривых плавления на приборе ДТ Прайм производства «ДНК-технология», Россия
Каковы условия хранения наборов для генотипирования полиморфных маркеров?
Наборы реагентов необходимо хранить при температуре -20°С. Срок годности 12 месяцев. Допускается хранение при 4°С в течение шести месяцев. Наборы транспортируются при температуре 4°С.
Допускается транспортировка при температуре не выше 30°С в течение 3 дней.
Список оборудования и расходных материалов для работы с тест-системами «Тест-NRAS-ткань», «Тест-KRAS-ткань», «Тест-BRAF-ткань», «Тест-BRAF-ткань»
Демонстрация программирования и запуска амплификации для определения мутаций генов на NRAS, KRAS, BRAF, EGFR приборе ДТ Прайм производства «ДНК-технология», Россия
Демонстрация программирования и запуска амплификации для определения мутаций генов на NRAS, KRAS, BRAF, EGFR приборе CFX96 производства «Bio-Rad», USA
Демонстрация программирования и запуска амплификации для определения мутаций генов на NRAS, KRAS, BRAF, EGFR приборе Rotor-Gene 6000 производства «QIAGEN», Germany
Что такое кросс-специфичная реакция, и где можно с ней столкнуться?
Демонстрация программирования и запуска амплификации для определения мутаций генов на NRAS, KRAS, BRAF, EGFR приборе QuantStudio 5 производства «ThermoFisher Scientific», USA
Видеоинструкция по работе с наборами «Тест-NRAS-ткань», «Тест-KRAS-ткань», «Тест-EGFR-ткань», «Тест-BRAF-ткань».
Образец направления на генетическое тестирование мутаций генов.
Каковы условия хранения наборов «Тест-NRAS-ткань», «Тест-KRAS-ткань», «Тест-EGFR-ткань»,
«Тест-BRAF-ткань»?
Наборы хранятся и транспортируются при температуре от 2 °С до 8°С. Срок годности 12 месяцев.
Допускается транспортировка при комнатной температуре (15–25°C) не более пяти суток.
Какие пробирки для забора крови необходимо использовать с целью последующего определения статуса
мутаций в свободно циркулирующей опухолевой ДНК?
Пробирки с EDTA (этилендиаминтетраацетат), сиреневая крышка: плазму нужно отделять в
течение 2 часов после забора крови.
Пробирки с CPDA (лимонная кислота, фосфат натрия, декстроза, аденин), желтая крышка:
допускается транспортировка цельной крови в лабораторию в течение 2 суток при
температуре 2-8°С.
Какой объем плазмы крови нужен для качественного определения статуса мутаций L858R, T790M и
делеций (del) в 19 экзоне гена EGFR?
Для данного анализа выделять ДНК следует не менее чем из 2 мл плазмы (рекомендуется 3-5 мл) и растворять в объеме элюента, исходя из количества проверяемых мутаций.
Какие амплификаторы подходят для работы с тест-системами производства «ТестГен»?
Как анализировать графики, полученные с помощью амплификатора CFX96, при работе с тест-системами «Тест-NRAS-ткань», «Тест-KRAS-ткань», «Тест-EGFR-ткань», «Тест-BRAF-ткань»?
Для ручной коррекции базовой линии воспользуйтесь следующими рекомендациями.
Скачать инструкцию
Принципы интерпретации результатов для тест-систем «Тест-NRAS-ткань», «Тест-KRAS-ткань», «Тест-EGFR-ткань», «Тест-BRAF-ткань».
В каждом срезе с FFPE-блока площадь фрагмента фиксированной ткани должна составлять до 250 мм2, толщина среза — до 10 мкм. Для выделения ДНК рекомендуется использовать 2 среза с FFPE-блока.
По результатам морфологического исследования опухолевые комплексы должны занимать не менее 60 % площади ткани в срезе с FFPE-блока, зоны некроза и кровоизлияния в совокупности должны занимать не более 15 % площади ткани в срезе с FFPE-блока.
Принципы интерпретации результатов для тест-системы «Тест-EGFR-12/24».
Самый оптимальный вариант – воспользоваться сервисом автоматической интерпретации результатов на портале «ТестГен». Для этого перейдите по ссылке https://pcr24.ru/analyzer и зарегистрируйтесь там. Далее выберите курсором «Добавить эксперимент» и загрузите в портал файл постановки анализа. После загрузки файла нажмите «Далее». Нажмите «Добавить тест» и выберите тест «EGFR-плазма». Впишите лот используемого набора, обозначьте пациентов, расставьте пробирки в том порядке, в котором они стоят в амплификаторе. После заполнения всех ячеек нажмите «Далее», нажмите «Анализировать». Когда программа закончит обрабатывать информацию, появится надпись «Данные успешно проанализированы». Для просмотра результатов нажмите «Готово».
Как можно обозначить образцы при проведении ПЦР, чтобы при загрузке постановки в портал https://pcr24.ru/analyzer шаблон теста заполнялся автоматически?
Демонстрация программирования и запуска амплификации для определения уровня экcпреccии мРНК гена PCA3 на приборе ДТ Лайт производства «ДНК-технология», Россия
Демонстрация программирования и запуска амплификации для определения уровня экcпреccии мРНК гена PCA3 на приборе CFX96 производства «Bio-Rad», USA
Схема интерпретации результатов анализа на определение относительного уровня экспрессии мРНК гена PCA3 набором «Проста-тест»
Особенности этапов пробоподготовки образцов мочи для последующего выявления в осадке относительного уровня экспрессии мРНК гена PCA3 набором «Проста-тест»
Перед взятием клинического материала проводится пальцевой ректальный массаж предстательной железы, целью которого является слущивание клеток предстательной железы в уретру.
Взятие первых струй мочи объёмом 20-50 мл в стерильную промаркированную ёмкость проводится не позднее чем через 15 минут после массажа предстательной железы.
Допускается хранение и транспортировка образцов цельной мочи или осадка без фиксатора в холодильнике (+2…+8 °С, не допуская замораживания) в течение не более чем 3 суток перед проведением непосредственно анализа.
Пробоподготовка заключается в получении осадка мочи. Способы получения осадков мочи с помощью центрифугирования подробно описаны в инструкции по выполнению преаналитического этапа определения уровня экспрессии гена PCA3.
Если ожидаемое время хранения осадка более 3 суток, то после центрифугирования отдельными стерильными наконечниками нужно добавить к осадку необходимый объем раствора для стабилизации и сохранения РНК (фиксатора), аккуратно ресуспендируя осадки пипетированием.
Полученные после процедуры пробоподготовки осадки в среде для стабилизации и сохранения РНК (фиксаторе) допускается хранить:
- при комнатной температуре – не более 3 суток,
- при +2…+8 °С – не более 10 суток,
- при -16 °С и ниже – не более 30 суток,
- при -86 °С и ниже – длительно.
Полученные после процедуры забора мочи и центрифугирования осадки без среды для стабилизации и сохранения РНК допускается хранить:
- при +2…+8 °С – не более 3 суток.
Оттаивание и повторное замораживание при транспортировке и хранении не допускается. Если длительное сохранение отрицательной температуры в течение всего срока транспортировки осадков с фиксатором не гарантируется (есть риск оттаивания образцов) – следует транспортировать образцы при низкой положительной температуре (+2 … +8 °С).
Ограничения по использованию образцов осадков мочи для последующего выявления в осадке относительного уровня экспрессии мРНК гена PCA3 набором «Проста-тест»
Анализируемый материал не подлежит использованию при нарушении условий хранения и транспортировки (температура, продолжительность, многократное замораживание-оттаивание).
Не гарантируется получение достоверных результатов при использовании образцов осадков мочи, загрязнённых гемоглобином (кровью).
Не допускается использование образцов, загрязнённых посторонним биологическим материалом: слизью, бактериями, крупными кристаллами солей, массивным осадком, состоящим из клеточного детрита и солей.
Крупные кристаллы органических и минеральных солей, видимые невооруженным глазом при перемешивании образца, обладающие механическими и химическими факторами воздействия на клетки простаты, могут исказить результаты анализа. Для удаления подобных кристаллов рекомендуется однократная промывка клеточного осадка в стерильном изотоническом растворе хлорида натрия с последующим центрифугированием 10 минут при 5 000 g.
Набор реагентов «Проста-Тест» не может быть использован у пациентов, которые принимают лекарства, влияющие на уровень простатспецифического антигена, такие как финастерид (Poscar), дутастерид (Avodart), альфузоксин (Uroxatral) и препарат антиандрогенной терапии (Lupron), а также антибиотики.
Простатэктомия, радиотерапия, биопсии простаты и др. могут повлиять на жизнеспособность ткани предстательной железы и, соответственно, на значение PCA3.
В случае ингибирования экстракции РНК и/или ПЦР из-за невалидного биоматериала (см. выше) рекомендуется провести повторный забор мочи после купирования острого воспалительного процесса в мочеполовом тракте и отмены или окончания курса приема препаратов, не менее чем через 3 дня.
Список оборудования и расходных материалов для работы с тест-системой «Проста-тест»
Демонстрация программирования и запуска амплификации для определения уровня экcпреccии мРНК гена PCA3 на приборе Rotor-Gene 6000 производства «QIAGEN», Germany
Какой режим анализа графиков выбрать для разных приборов?
Если постановка была на амплификаторе CFX96, то результаты нужно просматривать в режиме Регрессии (Setting – Cq Determination Mode – Regression). Если на амплификаторе DT, то в режиме Cp. Данные с прибора нужно внести в
таблицу. Бланк выдачи результата анализа
Как правильно хранить мочу для проведения анализа с помощью набора Проста-тест?
Допускается транспортировка и хранение образцов цельной мочи и/или полученных из данных образцов клеточных осадков при +2…+8°С до 3 суток перед проведением процедуры пробоподготовки. При необходимости хранения образцов более 3 суток необходимо отдельными стерильными наконечниками добавить к осадкам 1,0 мл раствора для стабилизации и сохранения РНК и аккуратно ресуспендировать осадки пипетированием.
Какие наборы рекомендуются для экстрации РНК из клеточного осадка мочи с целью последующего
анализа на экспрессию гена PCA3 («Проста-тест»)?
Неинвазивные пренатальные тесты
Выделение нуклеиновых кислот
Полиморфизмы
Онкология
Проста-тест
Протокол выделения из 4 мл плазмы.pdf
таблицу. 
